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1.1 復(fù)合菌培養(yǎng)物

根據(jù)本課題組前期研究成果，選用麩皮、玉米、米糠、棗渣、玉米皮及豆粕等為主要原料，將活化好的釀酒酵母菌 XＲ4、釀酒酵母菌 BC、枯草芽孢桿菌 A15 和乳酸菌按2∶2∶1∶1 比例混合，以 15%接種量接入固態(tài)發(fā)酵料中，加水使最終含水量為45%，于發(fā)酵車(chē)間固態(tài)堆積發(fā)酵48h制備復(fù)合菌培養(yǎng)物。復(fù)合菌培養(yǎng)物中含有 β － 葡聚糖、甘露聚糖、多肽、氨基酸和有機(jī)酸 5 種主效活性物質(zhì)，其含量分別為 ≥ 1450 mg /kg、≥ 670 mg /kg、≥1.3 mg /g、≥152.7 mg /kg 和≥1.48 mg /g。

1.2 基礎(chǔ)飼糧

母豬從妊娠第 85 天開(kāi)始飼喂哺乳料，基礎(chǔ)飼糧參照 NＲC(2012)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行配制，飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表 1。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)于 2018 年 5—6 月在河北省張家口市某豬場(chǎng)進(jìn)行，試驗(yàn)期從母豬臨產(chǎn)前 20 天至哺乳仔豬斷奶即母豬產(chǎn)后20天結(jié)束，共40d。選擇同一批次、胎次和體重相近的加系母豬40頭，隨機(jī)分為對(duì)照組和試驗(yàn)組，每組設(shè) 4 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5頭豬。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)飼糧中添加 10%復(fù)合菌培養(yǎng)物。

妊娠后期母豬飼養(yǎng)于妊娠舍內(nèi)，預(yù)產(chǎn)期前 7天轉(zhuǎn)至徹底消毒的分娩舍，妊娠后期，每日05:30和16:00 飼喂，根據(jù)體況每日飼喂 3 kg 左右;分娩前 3 天，每頭母豬的日飼喂量分別為 1.5、1.0 和0.5 kg;分娩 當(dāng) 天 不 飼 喂; 泌 乳 期 每 日 05: 30、10:00和 16:00 飼喂，分娩后第1 天飼喂 1.0 kg;第2 天后，在 1.0 kg 的基礎(chǔ)上每日增加 0.7 kg;第 5～6 天時(shí)，增加至 4.5 kg 左右;之后開(kāi)始自由采食(自由采食程度判斷標(biāo)準(zhǔn)為吃飽后料槽中略有余料為準(zhǔn))。哺乳仔豬由母乳喂養(yǎng)，不添加代乳料。母豬和仔豬均自由飲水，免疫、消毒、衛(wèi)生等常規(guī)程序按試驗(yàn)豬場(chǎng)相關(guān)制度進(jìn)行。所有試驗(yàn)豬均飼養(yǎng)于同一棟豬舍內(nèi)，并保證向陽(yáng)面與背陽(yáng)面每組欄數(shù)相等，盡可能控制環(huán)境因素一致。

1.4 血樣采集

分別于母豬分娩 24 h 內(nèi)和斷奶(產(chǎn)后 20 天) 第 2 天晨飼前，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選 3 頭母豬，耳靜脈采血 10 mL，置于采血管中，常溫靜置 30 min 后，3 000 r/min離 心 20 min，取上層血清分裝于1.5 mL離心管中，編號(hào)并記錄，－20 ℃保存待測(cè)。

1.5 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.5.1 母豬繁殖性能

記錄每頭母豬產(chǎn)活仔數(shù)、產(chǎn)健仔數(shù)、產(chǎn)弱仔數(shù)和死胎數(shù)，測(cè)定母豬窩均產(chǎn)活仔數(shù)、窩均產(chǎn)健仔數(shù)、窩均產(chǎn)弱仔數(shù)和窩均死胎數(shù)。健仔:體重＞0.8 kg，沒(méi)有畸形的仔豬;弱仔:體重＜0.8 kg 的仔豬。

1.5.2 哺乳仔豬生長(zhǎng)性能

記錄各仔豬出生后和 20 日齡體重(以早晨空腹稱(chēng)重為準(zhǔn))。計(jì)算哺乳仔豬初生平均個(gè)體重、20日齡斷奶平均個(gè)體重、初生平均窩重、20 日齡斷奶平均窩重。

1.5.3 母豬泌乳期采食情況

1.5.4 母豬便秘情況

通過(guò)觀察糞便顏色(黃色/黑色)、干濕度(干/濕)、氣味(惡臭/正常臭味)、形狀(是否結(jié)粒、結(jié)粒大小)、硬度及是否有黏液附著，記錄母豬產(chǎn)前 7天、產(chǎn)后 7 天便秘情況。

1.5.5 血清生化指標(biāo)

測(cè)定指標(biāo)包括:總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽固醇(TC)、葡萄糖(GLU)、尿素氮(UN)含量以及堿性磷酸酶(ALP)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性。以上指標(biāo)測(cè)試試劑盒均購(gòu)自于南京建成生物工程研究所，測(cè)定方法按照試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.5.6 免疫功能及抗氧化能力

測(cè)定指標(biāo)包括:免疫球蛋白 M(IgM)、免疫球蛋白 G(IgG)、白細(xì)胞介素 －2(IL-2)、白細(xì)胞介素 －6(IL-6)、腫瘤壞死因子 － α(TNF-α)含量及總抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量與總超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、過(guò)氧化氫酶(CAT)活性。以上指標(biāo)測(cè)試試劑盒均購(gòu)自于南京建成生物工程研究所，測(cè)定方法按照試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

采用 SAS 9.0 對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，用 t 檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，試驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P＜0.05 表示差異顯著，P＜0.01 表示差異極顯著。

2結(jié) 果 與 分 析

2.1 復(fù)合菌培養(yǎng)物對(duì)母豬繁殖性能的影響

復(fù)合菌培養(yǎng)物對(duì)母豬繁殖性能的影響見(jiàn)表 2。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組窩均死胎數(shù)減少0.75 頭(P＜0.01)，降低了45.45%;2 個(gè)組窩均產(chǎn)活仔數(shù)、窩均產(chǎn)健仔數(shù)和窩均產(chǎn)弱仔數(shù)均無(wú)顯著差異(P＞0.05)，但試驗(yàn)組有改善的趨勢(shì)，其中窩均產(chǎn)活仔數(shù)、窩均產(chǎn)健仔數(shù)分別增加了1.90%和 8.55%，窩均產(chǎn)弱仔降低了 15.25%?？傮w來(lái)看，復(fù)合菌培養(yǎng)物在降低母豬窩均死胎數(shù)上具有顯著的效果。

3.1 復(fù)合菌培養(yǎng)物對(duì)母豬繁殖性能的影響

胚胎死亡是影響母豬繁殖性能的重要因素之一，因此，降低母豬的死胎數(shù)對(duì)提高母豬的繁殖性能至關(guān)重要。研究表明益生菌發(fā)酵飼料部分替代普通飼料飼喂母豬后，其產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)仔成活數(shù)顯著高于對(duì)照組，仔豬的初生重顯著提高。

本課題組研制的復(fù)合菌培養(yǎng)物是一種含有 4株益生菌和多種營(yíng)養(yǎng)活性物質(zhì)的混合發(fā)酵產(chǎn)物。首先，該培養(yǎng)物能夠使消化道內(nèi)的乳酸菌、酵母菌等有益菌數(shù)量增加，促進(jìn)妊娠母豬腸道微生態(tài)平衡，抑制大腸桿菌等致病菌生長(zhǎng)，達(dá)到防御疾病的功效;其次，培養(yǎng)物中的 β － 葡聚糖和甘露聚糖能增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體的免疫力;最后，培養(yǎng)物中的多肽、有機(jī)酸和氨基酸能促進(jìn)動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。益生菌和營(yíng)養(yǎng)活性物質(zhì)共同作用于機(jī)體，參與機(jī)體生理活動(dòng)和代謝調(diào)節(jié)，不僅能改善動(dòng)物健康狀態(tài)，還能促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、增強(qiáng)機(jī)體免疫能力，從而降低了母豬窩均死胎數(shù)，提高了母豬的繁殖性能。

3.2 復(fù)合菌培養(yǎng)物對(duì)哺乳仔豬生長(zhǎng)性能的影響

在母豬妊娠后期和泌乳期飼糧中添加復(fù)合菌培養(yǎng)物后，顯著提高了哺乳仔豬斷奶平均重，其主要的原因可能是培養(yǎng)物提高了母乳質(zhì)量、泌乳量和仔豬自身腸道的吸收情況。有研究顯示，母乳質(zhì)量好的豬其仔豬斷奶體重大，生長(zhǎng)速度快，免疫能力強(qiáng);哺乳母豬母乳中的生物活性物質(zhì)如谷氨酰胺、表皮生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子等對(duì)仔豬腸道的發(fā)育和功能的成熟有促進(jìn)作用。

復(fù)合菌培養(yǎng)物中大量的益生菌及其代謝產(chǎn)物，如氨基酸、維生素、活性肽、有機(jī)酸和消化酶等，這些活性物質(zhì)能促進(jìn)腸道對(duì)養(yǎng)分的消化吸收，益生菌可調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)區(qū)系、促進(jìn)腸道健康發(fā)育;同時(shí)母乳中還含有免疫球蛋白和各種免疫調(diào)節(jié)因子;仔豬通過(guò)母乳而獲得了相應(yīng)的受益，其抗病能力以及對(duì)營(yíng)養(yǎng)的吸收率都得到了明顯的提高。

3.3 復(fù)合菌培養(yǎng)物對(duì)母豬采食量、便秘的影響

哺乳母豬采食量高低限制著母豬生產(chǎn)性能的發(fā)揮，也是決定仔豬斷奶體重及其健康狀況的關(guān)鍵因素。諸多研究都表明飼喂發(fā)酵飼料能提高仔豬、生長(zhǎng)育肥豬、泌乳母豬的平均日采食量。在規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)中，母豬在妊娠后期和哺乳前期發(fā)生便秘的現(xiàn)象十分普遍。母豬便秘可能會(huì)導(dǎo)致難產(chǎn)、死胎，引發(fā)子宮炎、乳房炎等，出現(xiàn)產(chǎn)后泌乳障礙等諸多問(wèn)題。研究表明，在母豬飼糧中添加發(fā)酵飼料、濕態(tài)發(fā)酵豆粕，可以不同程度改善母豬的便秘情況。

復(fù)合菌培養(yǎng)物主要通過(guò)釀酒酵母菌、乳酸菌、枯草芽孢桿菌等混合發(fā)酵而成，發(fā)酵過(guò)程會(huì)產(chǎn)生獨(dú)特的酸香氣味，能夠刺激母豬食欲，增加采食量;同時(shí)有益菌產(chǎn)生的各種消化酶、有機(jī)酸等，能降解飼料原料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，軟化纖維硬度，改善了飼料的適口性及利用率，促進(jìn)了母豬采食。發(fā)酵后產(chǎn)生的營(yíng)養(yǎng)活性物質(zhì)代謝酶和有機(jī)酸等可調(diào)節(jié)腸道微生物，使母豬胃腸道微生物區(qū)系、腸道內(nèi)環(huán)境得到改善，促進(jìn)腸道運(yùn)動(dòng)和增加食糜流通性，減少了母豬便秘的發(fā)生。

3.4 復(fù)合菌培養(yǎng)物對(duì)母豬血清生化指標(biāo)的影響

血清 UN 是蛋白質(zhì)分解的最終產(chǎn)物，其含量可以準(zhǔn)確地反映動(dòng)物機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝和氨基酸之間的平衡狀況。血清中的 ALP 主要來(lái)自肝臟和骨骼等組織，與體內(nèi)鋅和磷的代謝關(guān)系十分密切。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組母豬血清 UN 含量降低，血清ALP 活性升高，可能是由于復(fù)合菌培養(yǎng)物中含有豐富的氨基酸、多肽和消化酶，利于氨基酸的吸收，提高了蛋白質(zhì)的沉積率，而多肽能促進(jìn)礦物元素的被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)及在體內(nèi)的儲(chǔ)存，消化酶可以將飼料中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)分解成更利于動(dòng)物吸收的小分子物質(zhì)，因此提高了飼料利用率。

TC 是動(dòng)物體必需的營(yíng)養(yǎng)成分，是血液中脂蛋白總的含量，反映機(jī)體脂肪代謝情況。妊娠母體的血脂含量在一定范圍內(nèi)升高對(duì)母體和胎兒是有益的，但血脂含量過(guò)高使脂代謝異常，會(huì)導(dǎo)致胎盤(pán)早剝及妊娠高血壓綜合征的發(fā)生。已有研究顯示發(fā)酵飼料對(duì)血清中 TC 的含量沒(méi)有顯著影響或含量顯著降低，但本試驗(yàn)研究結(jié)果表明試驗(yàn)組母豬分娩時(shí) TC 含量顯著高于對(duì)照組，可能是由于培養(yǎng)物中的活性物質(zhì)加強(qiáng)了妊娠后期母體的脂肪代謝，母體血液中游離脂肪酸和甘油含量增加，游離的脂肪酸需要運(yùn)輸?shù)街付ǖ奈恢貌拍馨l(fā)揮作用，而脂肪酸的運(yùn)輸需要大量的膽固醇。血液中游離脂肪酸可以作為母體合成葡萄糖的優(yōu)先有效物質(zhì)，并作為能量進(jìn)行儲(chǔ)存以保證妊娠后期胎兒所需的營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)，有利于乳脂合成。

3.5 復(fù)合菌培養(yǎng)物對(duì)母豬免疫功能及抗氧化能力的影響

血清中抗體的升高可在一定程度上反映機(jī)體免疫功能增強(qiáng)。T-AOC 是反映整個(gè)機(jī)體總的抗氧化能力的指標(biāo)，其高低決定了機(jī)體清除自由基的能力。GSH-Px、T-SOD 和 CAT 是機(jī)體最主要的酶促抗氧化系統(tǒng)，其主要作用是清除自由基和活性氧、防止脂質(zhì)過(guò)氧化物生產(chǎn)。余淼等、王娟娟等研究均表明，微生物發(fā)酵飼料可提高動(dòng)物血清中抗體含量，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，具有抗氧化活性，提高抗氧化能力。

當(dāng)復(fù)合菌培養(yǎng)物中的有益微生物進(jìn)入動(dòng)物腸道后，可以建立胃腸內(nèi)微生態(tài)平衡，抑制病原微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)有益微生物的繁殖，從而提高機(jī)體免疫功能。同時(shí)，培養(yǎng)物中的營(yíng)養(yǎng)活性物質(zhì) β － 葡聚糖在消化道中不可溶、不吸收、不產(chǎn)生黏性，作為一種免疫促進(jìn)劑，能夠增強(qiáng)機(jī)體的非特異性免疫能力，改善動(dòng)物消化道的菌群結(jié)構(gòu);甘露聚糖是一種免疫功能較強(qiáng)的細(xì)胞壁多糖，不僅能增加動(dòng)物免疫能力，還能吸附外源性毒素和病原菌，在保持腸道微生態(tài)的平衡方面起重要作用。因此，在益生菌和營(yíng)養(yǎng)活性物質(zhì)的共同作用下，母豬的免疫功能得以提高。

另外，復(fù)合菌在發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生氨基酸、乳酸、類(lèi)胡蘿卜素、維生素 C、維生素 E 以及多酚類(lèi)等多種抗氧化活性物質(zhì)，通過(guò)采食進(jìn)入母豬體內(nèi)，提高了機(jī)體的抗氧化能力;培養(yǎng)物中含有包括乳酸菌在內(nèi)的多種益生菌，研究證明乳酸菌具有抗氧化活性，其抗氧化物質(zhì)主要包括抗氧化酶、錳離子和巰基化合物等。

4結(jié) 論